主要水生動(dòng)物疫病病原學(xué)及檢疫技術(shù)研究——深圳出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心研究成果

我國是世界水產(chǎn)養(yǎng)殖產(chǎn)量最多的國家之一，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)在我國農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中占有舉足輕重的地位，同時(shí)，水產(chǎn)貿(mào)易也是我國農(nóng)業(yè)創(chuàng)匯的重要支柱。深圳毗鄰香港，是連接國際和國內(nèi)的重要樞紐，每天有大量的水產(chǎn)品通關(guān)，因此深圳口岸也是重要水生動(dòng)物疫病傳入和傳出的高風(fēng)險(xiǎn)地區(qū)。記入國際獸疫局（OIE）名錄中的水生動(dòng)物病害有30多種，其中85%以上是病毒病。近年來，各個(gè)國家要求檢疫的病害種類越來越多，相關(guān)技術(shù)也在不斷提高。我國對(duì)水生動(dòng)物疫病的研究，往往是在疫病已經(jīng)暴發(fā)或?qū)︷B(yǎng)殖業(yè)造成了相當(dāng)大的危害后才開始，長期以來由于缺乏有效和規(guī)范的檢測(cè)方法，無法對(duì)這些疫病的發(fā)生進(jìn)行有效監(jiān)測(cè)和預(yù)警，因此，對(duì)水生動(dòng)物疫病病原進(jìn)行研究和建立相應(yīng)的檢測(cè)方法迫在眉睫。

“主要水生動(dòng)物疫病病原學(xué)及檢疫技術(shù)研究”屬于國家質(zhì)檢總局科技計(jì)劃項(xiàng)目，由深圳出入境檢驗(yàn)檢疫局動(dòng)植物檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心承擔(dān)。項(xiàng)目組在研究國內(nèi)外相關(guān)技術(shù)的基礎(chǔ)上，以威脅我國養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的主要水生動(dòng)物病原作為研究對(duì)象，在病原學(xué)和基因組學(xué)研究的基礎(chǔ)上，建立了16種水生動(dòng)物疫病的PCR或熒光PCR檢測(cè)方法以及高通量多重PCR檢測(cè)新技術(shù)，并制訂了相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，彌補(bǔ)了國內(nèi)在水生動(dòng)物疫病檢測(cè)技術(shù)方面的空白。2002年以來，相關(guān)技術(shù)成果廣泛應(yīng)用于國家農(nóng)業(yè)疫病防控部門，為國內(nèi)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展提供了保障，促進(jìn)了我國對(duì)外水產(chǎn)貿(mào)易的發(fā)展。該項(xiàng)目成果曾獲得2013年度中國水產(chǎn)學(xué)會(huì)范蠡科學(xué)技術(shù)獎(jiǎng)二等獎(jiǎng)

一、主要研究?jī)?nèi)容

1．在國內(nèi)分離出鯉春病毒血癥病毒（SVCV）毒株，對(duì)所分離毒株的理化特性進(jìn)行了研究，對(duì)SVCV國內(nèi)分離株進(jìn)行了分子進(jìn)化方面的研究，用酵母表達(dá)系統(tǒng)對(duì)SVCV國內(nèi)分離株糖蛋白基因進(jìn)行了表達(dá)，對(duì)SVCV國內(nèi)分離株進(jìn)行了基因組序列的測(cè)定和解析、細(xì)胞凋亡的初步研究以及細(xì)胞凋亡和RNA干擾的初步研究，建立了SVCV實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)技術(shù)。

2．KHV的分離和鑒定。開展了KHV的流行病學(xué)調(diào)查，實(shí)施了KHV在國內(nèi)感染情況的監(jiān)測(cè)活動(dòng)，建立了KHV實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法，研發(fā)了KHV的 PCR快速檢測(cè)試劑盒。

3．建立了16種主要水生動(dòng)物病毒高通量多重PCR和多重?zé)晒釶CR檢測(cè)平臺(tái)，研發(fā)了相關(guān)檢測(cè)試劑盒。

二、主要科技創(chuàng)新

1．鯉春病毒血癥病毒（SVCV）和錦鯉皰疹病毒（KHV）的分子生物學(xué)研究以及檢測(cè)試劑盒的研制和疫情調(diào)查

（1）首次在國內(nèi)從發(fā)病鯉魚分離出鯉春病毒血癥病毒的毒株，研究了SVCV毒株的敏感細(xì)胞和病毒粒子的理化特性及患鯉春病毒血癥的魚的組織病理學(xué)特點(diǎn)；對(duì)國內(nèi)分離株的全基因組進(jìn)行測(cè)序和功能基因的解析；對(duì)國內(nèi)分離株進(jìn)行了分子進(jìn)化方面的研究；研究了病毒毒株感染宿主細(xì)胞的特性和引起細(xì)胞凋亡的機(jī)理；對(duì)病毒的囊膜糖蛋白基因進(jìn)行了真核系統(tǒng)的表達(dá)，生產(chǎn)的蛋白為建立免疫學(xué)檢測(cè)方法奠定了基礎(chǔ)。

（2）首次從國內(nèi)發(fā)病魚體分離出錦鯉皰疹病毒；開展了錦鯉皰疹病毒在國內(nèi)養(yǎng)殖場(chǎng)的流行病學(xué)研究和錦鯉皰疹病毒病的監(jiān)測(cè)工作；在國內(nèi)建立了錦鯉皰疹病毒PCR和熒光PCR的檢測(cè)技術(shù)。

2．病原檢測(cè)的熒光PCR技術(shù)和多重?zé)晒釶CR技術(shù)

（1）在國內(nèi)首次建立了鯉春病毒血癥病毒、錦鯉皰疹病毒、魚傳染性造血器官壞死病毒、虹彩病毒蛙病毒屬、魚類神經(jīng)壞死病毒、斑點(diǎn)叉尾鮰病毒、殺鮭氣單胞菌、鮭魚腎桿菌、對(duì)蝦白斑綜合癥病毒、對(duì)蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒、對(duì)蝦Taura綜合癥病毒和對(duì)蝦黃頭病毒的實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)方法，涉及六種魚類病毒病、兩種魚類細(xì)菌病和四種蝦病毒病。

（2）在國內(nèi)首次建立了同時(shí)檢測(cè)病毒性出血性敗血癥病毒、魚傳染性造血器官壞死癥病毒、傳染性胰臟壞死癥病毒三種魚類病毒病的多重?zé)晒釶CR檢測(cè)技術(shù)，同時(shí)檢測(cè)病毒性出血性敗血癥病毒、魚傳染性造血器官壞死癥病毒、傳染性胰臟壞死癥病毒三種魚類彈狀病毒的多重?zé)晒釶CR檢測(cè)技術(shù)，同時(shí)檢測(cè)流行性造血器官壞死病毒、真鯛虹彩病毒、錦鯉皰疹病毒三種魚類DNA病毒的多重?zé)晒釶CR檢測(cè)技術(shù)，同時(shí)檢測(cè)對(duì)蝦白斑綜合癥病毒、對(duì)蝦傳染性皮下及造血組織壞死病毒兩種蝦病毒的多重?zé)晒釶CR檢測(cè)技術(shù)。

三、社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益

項(xiàng)目在水生動(dòng)物主要疫病病原快速和實(shí)時(shí)檢測(cè)技術(shù)方面填補(bǔ)了國內(nèi)多項(xiàng)空白。建立的16種主要水生動(dòng)物病毒高通量多重PCR和多重?zé)晒釶CR檢測(cè)平臺(tái)，使整個(gè)檢驗(yàn)周期縮短80 %以上，降低檢測(cè)成本50 %以上，大大提高了通關(guān)速度，滿足了現(xiàn)代檢驗(yàn)檢疫方法向高通量發(fā)展的要求。項(xiàng)目成果已經(jīng)廣泛應(yīng)用于全國質(zhì)檢部門、農(nóng)業(yè)部門、養(yǎng)殖場(chǎng)、漁業(yè)部門等技術(shù)執(zhí)法部門和企業(yè)內(nèi)部控制，為質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫部門“守國門”、“把場(chǎng)門”提供了重要的技術(shù)手段，成為農(nóng)業(yè)部門開展疫病監(jiān)測(cè)計(jì)劃的有力工具，在我國防止外來疫病入侵工作中發(fā)揮了重要作用。

截止到2007年，為各級(jí)企事業(yè)單位節(jié)省經(jīng)濟(jì)費(fèi)用超過1000萬。利用項(xiàng)目成果開展全國出口魚養(yǎng)殖場(chǎng)和部分養(yǎng)殖場(chǎng)疫情監(jiān)測(cè)和流行病學(xué)調(diào)查，實(shí)現(xiàn)了對(duì)水生生物高發(fā)疫病的有效預(yù)警和防控，減少了疫病暴發(fā)，所產(chǎn)生的經(jīng)濟(jì)效益不可估量。此外，根據(jù)項(xiàng)目成果制訂的水生動(dòng)物疫病檢測(cè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和國家標(biāo)準(zhǔn)，在全國范圍廣泛使用，在消除技術(shù)性貿(mào)易壁壘，促進(jìn)水生動(dòng)物貿(mào)易發(fā)展方面發(fā)揮了重要作用。由于深圳出入境檢驗(yàn)檢疫局水生動(dòng)物疫病檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室在檢測(cè)技術(shù)方面的突出貢獻(xiàn)，國際動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）批準(zhǔn)該實(shí)驗(yàn)室成為中國大陸首個(gè)OIE魚病參考實(shí)驗(yàn)室（鯉春病毒血癥OIE參考實(shí)驗(yàn)室）。