技術簡介：2006年我國南方爆發的“高熱病”由Nsp2基因部分缺失的豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）突變株引起，目前，該病幾乎已擴散到全球所有養豬業發達的國家和地區，給世界養豬業每年造成的損失達幾十億美元，成為近年來世界獸醫學界異常關注的疾病之一，因此PRRSV感染的早期檢測刻不容緩。一步反轉錄環介導等溫擴增技術（Reverse transcription-1oop mediated isothermal amplification，RT-LAMP）具有特異、快速、靈敏、簡便的特點，可用于PRRSV早期快速檢測，并因簡單易行，適于基層和現場檢測。

環介導等溫擴增(，LAMP)技術是近年來發展出的一種敏感、特異、方便快捷的核酸擴增技術。與傳統PCR方法相比，LAMP不需要熱循環，為等溫擴增。且由于LAMP反應中產生大量的副產物一白色焦磷酸鋏沉淀，也可用結合雙鏈DNA的熒光染料SYBR Green I染色，擴增產物可不經過電泳，通過肉眼觀察或濁度計或紫外燈即可判定結果。因此LAMP是一種不需要熱循環儀、肉眼即可判定結果的高度特異和敏感的DNA擴增方法。該方法具有特異性強、等溫靈敏、操作簡單、產物易檢測等優點，適合于現場、戰時野外或條件較差的實驗室進行病原微生物的快速檢測。

該方法采用能特異識別靶序列上6個位點的4條引物及一種具有鏈置換活性的DNA聚合酶(Bst DNA polymerase)，在恒溫條件(60-65℃)，進行核酸的指數級擴增，在45-60 min的時間里其擴增效率可達到109-1010個數量級，結果可以直接肉眼觀察，不需要特殊儀器設備，適合于現場、戰時野外或條件較差的實驗室進行病原微生物的快速檢測。

技術來源：國家科技計劃

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